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色譜柱柱效下架了怎么辦?

更新時間:2021-09-07

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色譜柱是色譜分離的核心。一支合適,穩(wěn)定,高效的色譜柱對建立普適性強(qiáng),重現(xiàn)性好的方法是不可少的。因色譜柱是消耗品,隨著使用時間或進(jìn)樣次數(shù)的增加,會出現(xiàn)色譜峰高降低,峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象,一般來說是柱效的下降。此時需要對色譜柱進(jìn)行再生:
(1 )反相柱的再生,采用以甲醇:水=90: 10(V/V),純甲醇,異丙醇,二氯甲烷等溶劑作流動相,順次沖洗,每種流動相流經(jīng)色譜柱的量為20~30倍色譜柱體積然后再以相反順序沖洗色譜柱。
(2)正相柱再生。順次以正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作流動相沖洗色譜柱。每步注意平衡溶劑的順序,不要顛倒。每種流動相流經(jīng)色譜柱的量為20-30倍柱體積(因異丙醇的粘度較大,沖洗過程中請注意調(diào)整沖洗的流速),用甲醇沖洗完后,再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必需嚴(yán)格脫水。另外,請清洗前嚴(yán)格熟讀色譜柱說明書,了解哪些溶劑不可用。
(3)離子交換柱的再生。長時間在高pH值和高離子強(qiáng)度緩沖溶液中使用,將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力降低。用稀酸緩沖溶液沖洗,可使陽離子柱再生;反之,用稀堿緩沖溶液沖洗,可使陰離子柱再生。以上色譜柱的再生方法并不是絕對的標(biāo)準(zhǔn)方法,使用者可根據(jù)自己的實(shí)際經(jīng)驗(yàn)和目的,選擇合適的并能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑作流動相,按正方向或反方向的沖洗。
但是需要指出是,無論采用什么方法再生色譜柱,均不可能*隊(duì)恢復(fù)柱效或其他參數(shù)至新柱水平。
另外,對于目前的UPLC柱,由于色譜柱體積越來越小,柱外效應(yīng)的影響就更加顯著,需要更小池體積的檢測器(甚至采用柱上檢測),更小死體積的柱接頭和連接部件。配套使用的設(shè)備應(yīng)具備如下性能:輸液泵能精密輸出1-100μL/min的低流量且能提供更高的壓力,進(jìn)樣閥能準(zhǔn)確、重復(fù)地進(jìn)樣微小體積的樣品。且由于進(jìn)樣量小,要求高靈敏度的檢測器。
 
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